短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX几丁质酶基因(chiD)的克隆与原核表达

• 作者: 刘波 车建美 陈庆河 黄丹丹
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 短短芽胞杆菌 几丁质酶基因 克隆 表达 IPTG诱导
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 1757-1763
• 页数: 7页
• 分类号: R378
• 字数: 4946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.09.017

摘要

以短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到几丁质酶基因chiD序列,再将chiD序列连接到pMD18-T克隆载体上,形成重组载体pMD 18-T-chiD,转化大肠杆菌DH5α并测序,经过核苷酸和氨基酸序列分析获得几丁质酶基因chiD的序列片段为1 524 bp,编码507个氨基酸,理论蛋白质分子量约54.55 ku,其等电点约为5.77,表明该几丁质酶为酸性几丁质酶.将重组质粒pMD 18-T-chiD双酶切后与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET28a-c hiD,并转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,结果表明:重组蛋白质的分子量约55 ku,与预测的蛋白分子量结果一致.为了提高重组蛋白的表达量,对培养时间、IPTG浓度和温度3个参数进行优化,并将表达产物进行SDS-PAGE分析,最后得出重组载体pET28a-chiD的最佳诱导表达参数分别为8h、0.5 mmol/L和28℃.这为短短芽胞杆菌来源的几丁质酶的进一步研究奠定了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘波	福建省农业科学院农业生物资源研究所	496	4446	29.0	44.0
2	陈庆河	福建省农业科学院植物保护研究所	58	793	16.0	25.0
3	车建美	福建省农业科学院农业生物资源研究所	85	644	14.0	19.0
4	黄丹丹	福建省农业科学院农业生物资源研究所	3	34	3.0	3.0