R122L突变提高重组人阴离子型胰蛋白酶的稳定性的研究

• 作者: 吴倩 李素霞 马强
• 来源期刊: 中国生化药物杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组人阴离子型胰蛋白酶 点突变 R122L 稳定性
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 页码范围: 61-64,67
• 页数: 5页
• 分类号: R394.3
• 字数: 3714字
• 语种: 中文

摘要

目的：研究自切位点突变R 122 L对重组人阴离子型胰蛋白酶稳定性的影响。方法在大肠杆菌中表达重组人阴离子型胰蛋白酶和R 122 L突变体，并进行纯化，对纯化后酶及其突变体的稳定性进行对比研究。结果 mhT 2（R 122 L）发挥催化活力的最适pH为7～11；低温及酸性环境中稳定性较好，其活力在pH 7.6条件下同样能被典型的金属离子螯合剂（如EDTA）、还原剂（如β-ME）、变性剂、Fe 3+及丝氨酸蛋白酶抑制剂所抑制，以N-苯甲酰-L-精氨酸（n-benzoyl-l-arginine ethyl ester，BAEE）作为底物时的米氏常数为0.010 mmol/L。结论相比于hT2野生型，R 122 L突变体蛋白最适pH范围增大，耐热性能也有所提高，与底物BAEE的亲和力增强，同时对于Fe 3+、金属离子螯合剂、还原剂以及变性剂等的耐受力也有增强，稳定性大大提高。