猪磷酸酪氨酸互作结构域1基因的融合表达及其多克隆抗体的制备和鉴定

• 作者: 刘光芒 周波 王欢 贾刚 赵华 陈小玲 黄志清
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪PID1 原核表达 纯化 质谱鉴定 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 3349-3355
• 页数: 7页
• 分类号: S828
• 字数: 5231字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2014.11.022

摘要

本文旨在通过原核表达获得猪磷酸酪氨酸互作结构域1（ pPID1）重组蛋白，并制备pPID1多克隆抗体。将pPID1基因插入pET28a（＋），构建重组pET28a（＋）-pPID1大肠杆菌表达质粒，然后将重组质粒pET28a（＋）-pPID1转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中，获得的重组子以不同异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（ IPTG）浓度、温度和时间诱导，确定pPID1融合蛋白表达的最适条件。将表达产物经镍离子-亚氨基二乙酸（ Ni2＋-IDA）亲和层析纯化后进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ MALDI-TOF-MSMS）鉴定。同时，将纯化获得的pPID1融合蛋白免疫SD大鼠，制备pPID1多克隆抗体，并检测抗体效价。结果表明：pPID1融合蛋白表达的最佳条件为30℃以0．1 mmol/L IPTG 诱导4 h；纯化的融合蛋白经 MALDI-TOF-MSMS 鉴定为pPID1；特异性的pPID1多克隆抗体成功制备，抗体效价为1∶20480。本试验成功制备了高纯度的重组pPID1及其多克隆抗体。