EV71亚单位VP1的原核表达、纯化及免疫原性分析

• 作者: 胡琼文 谢婷婷 马永平
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人肠道病毒71型(EV71) VP1融合蛋白 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2014,（24）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 4478-4481
• 分类号: R-33
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达并纯化人肠道病毒71型(EV71)亚单位VP1蛋白,分析其免疫原性.方法 采用PCR技术扩增EV71 VP1 (AB204852.1)基因序列,构建重组质粒pET32a(+)-VP1并转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达6×His-VP1融合蛋白,将表达的蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化、TGE液复性后免疫新西兰大白兔,制备抗VP1的抗血清,用间接ELISA法检测抗血清效价.结果 重组工程菌pET32a(+)-VP1/BL21 (DE3)高效表达了相对分子质量约为42 kD的VP1融合蛋白,蛋白经纯化复性后免疫新西兰大白兔所得抗血清效价大于1∶625 000.结论 原核表达系统pET32a(+)/NL21 (DE3)能高效表达EV71亚单位VP1融合蛋白,蛋白经纯化复性后具有良好的免疫原性,为进一步研制以双歧杆菌为抗原载体的新型疫苗奠定了基础.