重组人可溶性BAFF蛋白的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 姚丽
• 来源期刊: 生物技术世界
• 学科: 医学
• 关键词: rhsBAFF 融合蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: swjssj_2014,（9）
• 页码范围: 8-9
• 页数: 2页
• 分类号: R3411

摘要

目的:在大肠杆菌中表达人B细胞活化因子可溶性胞外域134~285(rhsBAFF134-285)蛋白,并进行纯化与鉴定。方法:重组表达质粒pET-32ammrhsBAFF在大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)中于16℃下进行IPTG诱导表达。经His亲和层析纯化得到融合蛋白后进行TEV蛋白酶酶切切除Trx融合标签,进而纯化得到rhsBAFF目的蛋白,SDS-PAGE、Western Blot和ELISA鉴定纯化产物。结果:Trx-rhsBAFF融合蛋白相对分子量约31000,16℃表达时主要以包涵体形式表达,上清中也有部分表达。融合蛋白纯化后经酶切再纯化得到相对分子量约17000、纯度95%以上的rhsBAFF目的蛋白,鉴定可被小鼠抗rhBAFF单克隆抗体和小鼠抗rhBAFF多抗血清特异性识别。结论:成功原核表达并纯化得到rhsBAFF蛋白,为进一步开发用于研究人类自身免疫性疾病的BAFF检测试剂盒奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚丽	上海交通大学生命科学技术学院	1	0	0.0	0.0