HPD基因启动子报告基因载体构建与转录活性分析

• 作者: 孔祥祯 李长燕 杨晓明 满善晴 董小明 詹轶群 陈慧
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HPD基因 启动子 肝脏特异表达 转录活性分析
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 30-41
• 分类号: Q786|R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20150405

摘要

目的:HPD是一种酪氨酸分解代谢途径中的关键酶,特异表达于肝脏.目前对HPD的研究主要集中在HPD与酪氨酸血症等疾病的关系上,而对其转录调控的报道较少,并且对HPD在肝脏中特异性表达的转录调控机制尚不清楚,也未见报道.通过构建HPD基因启动子荧光素酶报告基因载体,检测其在肝源细胞中的特异转录活性,进而揭示其肝脏特异性表达的调控机制.方法:运用UCSC在线数据库分析人HPD基因组结构,并获得其5'端上游启动子区域-2000～+39bp的DNA序列.以人的肝癌细胞HepG2基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列,并克隆到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体上.通过设计不同引物,进一步构建系列缺失体,共获得7个不同长度的荧光素酶报告基因载体.将构建的载体分别转染HepG2、L02及HEK293细胞,通过双荧光素酶活性分析实验检测不同缺失体的转录活性.结果:报告基因实验结果显示-600～-400区域在肝源细胞系HepG2和L02细胞中具有较强转录活性,而在HEK293细胞中活性较低,-400～+39区段则在两种细胞中均有转录活性.生物信息学分析结果显示-600～-400区域内存在较多肝脏特异性转录因子结合位点.结论:成功构建了HPD基因启动子荧光素酶报告基因栽体,发现-600～-400存在调控HPD肝脏特异表达的关键元件,为进一步深入揭示HPD肝脏特异性表达的转录调控机制奠定了理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	詹轶群	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	36	155	5.0	11.0
2	李长燕	安徽医科大学研究生学院	23	130	5.0	11.0
4	董小明	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	2	0	0.0	0.0
7	陈慧	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	7	12	2.0	2.0
8	满善晴	安徽医科大学研究生学院	1	0	0.0	0.0
12	孔祥祯	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	1	0	0.0	0.0