人Cdc25 B基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析

• 作者: 丁库克 丁立新 刘晓丹 周平坤 姜晓燕 赵现哲
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: Cdc25B基因 启动子 转录因子 碱基序列 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 261-265,270
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4622字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2018.04.004

摘要

目的 构建人细胞分裂周期25家族蛋白B(Cdc25B)基因启动子(promoter)荧光素酶报告基因载体pGL3-Cdc25B-promoter,并检测其转录活性.方法 应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得人Cdc25B基因5′端非编码区处包含转录起始位点在内的-2000～+100的DNA序列.以正常人全血基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列,并插入到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体上.通过设计不同引物,进一步构建系列缺失体,共获得7个不同长度启动子序列的报告基因载体.将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染HeLa细胞,通过双荧光素酶报告基因活性测定实验检测不同缺失体的转录活性.利用定点突变及RNA干扰(RNAi)探究预测的转录因子对Cdc25B转录活性的影响.结果 构建的人Cdc25B基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Cdc25B-promoter经酶切鉴定及测序结果比对完全正确,将其转染HeLa细胞后,检测到荧光素酶高表达(P<0.05).启动子系列缺失分析显示-160～-53片段包含基本核心启动子,与生物信息学的预测结果一致.定点突变及RNA干扰显示NF-YB转录因子对Cdc25B起正调控作用.结论 成功构建了7个具有转录活性的人Cdc25B启动子缺失片段,确定了NF-YB是Cdc25B转录的一个重要调控因子,为进一步将其用于抗肿瘤药物的筛选与评价奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜晓燕	中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所	34	72	5.0	7.0
2	赵现哲	中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所	5	3	1.0	1.0
3	丁库克	中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所	23	80	5.0	8.0
4	周平坤	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京市放射生物学重点实验室	5	0	0.0	0.0
5	丁立新	中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所	6	4	2.0	2.0
6	刘晓丹	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京市放射生物学重点实验室	1	0	0.0	0.0