人血小板第4因子基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析

• 作者: 何丽娟 姜佳楠 岳文 李艳华 范增 裴雪涛 覃金华 郑敏
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 血小板因子4 巨核细胞 绿色荧光蛋白质类
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 733-738
• 页数: 6页
• 分类号: R331.2|Q78
• 字数: 5148字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.10.003

摘要

目的 构建人血小板第4因子(PF4)基因启动子-绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体PLVX-PF4-promoter-GFP,并检测其转录活性.方法 在NCBI数据库中获得人PF4基因启动子5'端非编码区包含转录起始位点在内的-245～+49 bp的DNA序列.以正常人全血基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列,与GFP序列连接并插入到PLVX-tight-puro载体上,构建重组质粒PLVX-PF4-promoter-GFP.将其包装慢病毒并感染MEG01细胞,用嘌呤霉素筛选出稳转细胞株,并用12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)诱导MEG01细胞分化成熟,通过流式细胞术检测GFP表达率,从而验证报告基因的转录活性.结果 构建的载体PLVX-PF4-promoter-GFP经酶切鉴定及测序结果比对完全正确,将其转入MEG01细胞,经药物筛选获得了MEG01-PF4-GFP细胞株.流式细胞术检测结果表明,正常培养条件下的MEG01-PF4-GFP细胞中GFP阳性细胞率低[(5.467±0.2603)％],该细胞经PMA诱导分化后,GFP阳性细胞率显著升高[(24.93±2.571)％].结论 成功构建了人PF4启动子-GFP报告基因载体,为后续深入研究PF4基因的调控机制及巨核细胞发育分化的分子生物学机制奠定了基础.