基于鞭毛蛋白基因的坚强芽孢杆菌特异性套式PCR和荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 宋晓玲 王海亮 许彦芬 陈大菾 黄倢
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 坚强芽孢杆菌 鞭毛蛋白 hag基因 套式PCR 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 68-73
• 页数: 6页
• 分类号: S917
• 字数: 4637字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20150311

摘要

细菌鞭毛蛋白编码基因hag具两端的保守序列及中间可变区域，在细菌的分类和鉴定中可作为分子标记。本研究克隆了坚强芽孢杆菌鞭毛蛋白编码基因hag部分序列，根据所得核酸序列设计套式引物Bfho和Bfhi，进行菌株的套式PCR特异性检测。此外，采用内引物Bfhi建立坚强芽孢杆菌荧光定量PCR特异性检测方法并确定该方法的检测限，对15个模拟样品进行检测并对阳性组中坚强芽孢杆菌的含量进行定量分析。结果显示，克隆得到的坚强芽孢杆菌hag基因长为1213 bp，经比对，与枯草芽孢杆菌 hag 基因相似性为13%?15%。荧光定量 PCR 方法对坚强芽孢杆菌菌株PC004和PC024的检测限分别为17.3×103和19.7×103 CFU/ml。模拟样品检测结果显示，15个样品中检测出7个阳性，并同时定量各样品中坚强芽孢杆菌的含量。本研究建立的坚强芽孢杆菌检测方法特异性强、操作时间短、灵敏度高，可为该菌的实际检测提供技术支持。