利用CRISPR/Cas9敲除斑马鱼细胞周期蛋白M2(CNNM2)基因

• 作者: 吕为群 竹个个 邹华锋 黄振玉
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas9 CNNM2基因 斑马鱼 基因敲除
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 810-816
• 分类号: S917
• 语种: 中文

摘要

细胞周期蛋白M2(CNNM2)是参与体内镁离子平衡的重要候选基因,实验采用的CRISPR/Cas9系统是近几年发展起来的一类新型基因打靶技术.在斑马鱼CNNM2基因的一号外显子处选取打靶位点,构建sgRNA表达载体.随后将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物分别以约30 pg和300 pg的剂量显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中实现对目的靶基因CNNM2的敲除.24～48 h后PCR产物回收,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定突变类型.为进一步验证突变的稳定遗传性,选择了具有敲除效率的F0与野生型斑马鱼进行外交,对获得的F1进行逐一剪尾,提取DNA进行PCR和测序分析.结果显示F0和F1均获得了不同程度插入、缺失和移码突变类型,且F0突变效率为88％.本研究获得了能稳定遗传的CNNM2基因敲除斑马鱼个体,并为将来进一步研究CNNM2基因和机体镁离子稳态之间的关系打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕为群	上海海洋大学水产与生命学院	60	329	9.0	15.0
2	黄振玉	上海海洋大学水产与生命学院	3	9	2.0	3.0
3	竹个个	上海海洋大学水产与生命学院	1	2	1.0	1.0
4	邹华锋	上海海洋大学水产与生命学院	7	6	2.0	2.0