近江牡蛎金属硫蛋白(MT)的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 于波 张其中 麦杰晖
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 近江牡蛎 金属硫蛋白(MT) 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体制备
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1104-1111
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.08.014

摘要

双壳贝类金属硫蛋白(metallothionein,MT)可作为指示重金属污染的生物标志物,为了进一步研究MT作为重金属污染指示分子特点及其他生物学功能,需要抗MT的特异抗体.本研究构建了双壳贝类近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)金属硫蛋白重组表达质粒pGEX-4T-1/MT,将其转化到大肠杆菌(Escherichia coli)菌株M15中诱导表达,优化诱导条件后,在20℃、0.2 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导16 h后产生大量可溶的谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase (GST)-tagged MT,GST-MT)融合蛋白.12％十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot分析结果表明,成功获得了重组表达蛋白GST-MT.采用谷胱甘肽琼脂糖树脂(glutathione sepharose 4B)纯化该融合蛋白,于25℃凝血酶原位酶切16h获得了重组MT,其分子量为9kD.用纯化的重组MT免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus),获得效价大于1∶128 000的抗近江牡蛎MT的多克隆抗血清,该抗体能与近江牡蛎组织中的MT分子特异结合,实现了近江牡蛎MT的原核高效表达和多抗制备.