布鲁氏菌外膜蛋白Omp16的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 张涛 徐梅 李晓婷 熊流新 胡永林 闵迅 陈安林 陈昱希 黄健
• 来源期刊: 现代医药卫生
• 关键词: 布鲁菌属 基因表达 Omp16 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 669-673
• 页数: 5页
• 字数: 5526字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-5519.2018.05.008

摘要

目的 克隆、表达、纯化布鲁氏菌Omp16重组蛋白,并制备多克隆抗体,评估其作为布鲁氏菌蛋白质疫苗的可行性.方法 PCR法扩增全长及截短的布鲁氏菌Omp16基因,并将其克隆入pET28a(+)载体中;经菌液PCR和测序鉴定后,再转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达及镍柱纯化后,获取高纯度的Omp16目的蛋白,然后将其免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,Western blotting检测抗体的特异性免疫反应.结果 成功构建了全长及截短表达的Omp16原核表达质粒,经IPTG诱导表达后,获得了全长及截短Omp16蛋白,免疫BALB/c小鼠后获得了高效价的抗Omp16多克隆抗体.Western blotting实验证实2种Omp16重组蛋白(Omp16-1、Omp16-2)均能与其相应抗体发生特异性免疫反应.结论 该研究成功克隆、表达、纯化了全长及截短的Omp16重组蛋白,2种Omp16重组蛋白均具有很好的免疫原性,且能与高滴度的小鼠多克隆抗体发生特异性结合,为后续以Omp16蛋白为基础的疫苗研发奠定了实验基础.