为获取具有生物学活性的弓形虫MAPK1蛋白,根据GenBank中编码MAPK1的已知序列设计并合成1对引物,用NCoⅠ和HindⅢ双酶切后,连接到同样双酶切的原核表达载体PET?28a上,构建重组表达质粒PET?28a?MAPK1并转化至E.coli BL21感受态,用IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,纯化后进行SDS-PAGE和 Western blotting分析。结果表明:表达质粒在E.coli BL21中得到表达,克隆的MAPK1基因与GenBank中收录的基因序列同源性为99?9%。对重组质粒进行酶切鉴定,获得1599 bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,成功地构建了重组质粒PET?28a?MAPK1。Ni2+螯合柱纯化后蛋白浓度为0?26 mg/mL,可用作免疫原,经SDS-PAGE电泳显示PET?28a?MAPK1融合蛋白的分子量约为58 ku。 Western blotting显示融合蛋白具有良好的抗原性。