大鼠CB1基因真核表达载体的构建及其对CaSki细胞凋亡的影响

• 作者: 严磊 李晶 王会娟 王蕾 赖国旗 赵婷婷
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CB1基因 HEK293细胞 CaSki细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 153-158
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3811字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2015.02.010

摘要

目的：构建大鼠CB1（ rCB1）基因真核表达载体，检测rCB1基因在细胞中的表达，研究rCB1对人宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA，RT-PCR扩增rCB1基因，通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与pCDNA 3.1（＋）质粒，构建pcDNA3.1（＋）-rCB1。脂质体法将其转染到HEK293和CaSki细胞， Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测rCB1的表达及定位，流式细胞仪检测细胞凋亡率， Western blot与实时荧光定量PCR检测rCB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300 bp的载体片段和1500 bp的目的片段，测序结果和rCB1基因序列（ NM＿012784.4）一致。转染HEK293细胞后， rCB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染CaSki细胞后， rCB1使细胞凋亡率增加（ P＜0.05）；rCB1基因上调Bax、Bad的表达，同时抑制Bcl-2的表达，与空白组比较，其差异具有显著性（ P＜0.05）。结论成功构建了pcDNA3.1（＋）-rCB1真核表达载体， rCB1表达于细胞膜和细胞质，rCB1可以明显促进宫颈癌CaSki细胞凋亡，其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赖国旗	重庆医科大学实验动物中心	61	250	8.0	12.0
3	严磊	重庆医科大学实验动物中心	6	50	2.0	6.0
4	李晶		50	109	5.0	9.0
5	王蕾	重庆医科大学实验动物中心	12	30	4.0	4.0
6	赵婷婷	重庆医科大学实验动物中心	10	16	2.0	3.0
7	王会娟	重庆医科大学实验动物中心	6	8	2.0	2.0