人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装

• 作者: 李玉云 李见 王露 翟玮玮
• 来源期刊: 蚌埠医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 凋亡相关因子基因 RNA干扰 慢病毒载体 293T细胞
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: Q343.1|R373
• 字数: 3176字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.01.003

摘要

目的:构建人凋亡相关因子(Fas)基因短发夹RNA慢病毒载体,实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达.方法:根据Fas基因mRNA序列,设计4组靶向Fas基因的短发夹RNA序列,合成、退火形成双链DNA片段,与经过DNA内切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞,对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序及比对分析.通过转染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.结果:经酶切及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜观察证明病毒转入293T细胞,感染效率＞90％,并获得高滴度的慢病毒载体,病毒滴度为3×108 TU/ml.结论:成功构建人Fas基因RNA干扰慢病毒载体,为下一步转染脐带间充质干细胞提供理论参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉云	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	97	332	9.0	11.0
2	王露	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	7	29	3.0	5.0
3	翟玮玮	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	6	34	3.0	5.0
4	李见	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	7	14	3.0	3.0