人膜联蛋白A3的原核表达及纯化

• 作者: 李善玉 牛诚诚 王冰 高萍
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 膜联蛋白A3 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 364-367,371
• 分类号: Q257|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达人膜联蛋白(annexin,ANX)A3(ANX A3),并进行纯化.方法 提取人胎盘样品总RNA,反转录建立cDNA文库,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增anx A3基因编码区全长,连接至克隆载体pEASY-Blunt上,测序鉴定.用primix extaq酶重新扩增anx A3基因,与表达载体pEASY-E1连接,构建重组表达质粒pEASY-anx A3,转化E.coli Transetta DE3,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经6×His纯化介质及Bio-Rad BioLogic DuoFlowChromatography Systems纯化后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 重组表达质粒经菌落PCR鉴定,阳性克隆可扩增出972 bp的目的片段,与NCBI中GenBank上报道的anx A3序列完全一致.纯化的重组蛋白相对分子质量约为36 000,可与鼠Anti 6×His-Tag单克隆抗体特异性结合,浓度为400 μg/ml.结论 成功构建了重组原核表达质粒pEASY-anxA3,并在E.coli Transetta DE3中表达了重组蛋白,为进一步研究ANX A3在哮喘病的起因和形成中的作用及机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高萍	北京大学深圳医院儿科	8	23	3.0	4.0
2	王冰	吉林大学第一医院儿科	61	383	11.0	17.0
3	李善玉	吉林大学第一医院儿科	29	127	6.0	9.0
4	牛诚诚	吉林大学第一医院儿科	2	6	1.0	2.0