大肠杆菌BL21(DE3)膜组分相关基因的敲除对重组蛋白胞外分泌的影响

• 作者: 何冰芳 储建林 周有治 朱芸
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌BL21(DE3) 膜脂 基因敲除
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 1551-1559
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150130

摘要

[目的]探究Escherichia coli BL21(DE3)中膜组分相关的脂多糖合成基因waaF或msbB的敲除对重组蛋白胞外分泌的影响.[方法]运用Red重组技术将E.coli BL21 (DE3)染色体上的基因waaF或msbB敲除,构建敲除菌株E.coli BL21(ΔwaaF)、E.coli BL21(ΔmsbB).将本实验室保存的带有β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,ββ-FFase)、青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,PGA)基因的重组质粒pET-ffase、pET-pga分别转入敲除菌株及出发菌株中,构建工程菌株E.coli BL21(ΔmsbB)/pET-ffase、E.coli BL21(ΔwaaF)/pET-ffase、E.coli BL21(DE3)/pET-ffase、E.coli BL21(ΔmsbB)/pET-pga、E.coli BL21(ΔwaaF)/pET-pga、E.coli BL21 (DE3)/ pET-pga.最后通过摇瓶发酵研究敲除菌株对β-FFase、PGA胞外分泌的影响.[结果]当诱导表达4h,以出发菌株E.coli BL21 (DE3)为宿主时,β-呋喃果糖苷酶β-FFase的胞外分泌量占总表达量的2.6％,以敲除菌株ΔmsbB为宿主时,胞外分泌量达到19.7％,而以敲除菌株ΔwaaF为宿主时,胞外分泌量达到50.9％.另外,当诱导表达24 h,以敲除菌株ΔwaaF为宿主时,青霉素G酰化酶PGA的胞外酶活是出发菌株中的4.1倍,达到1708 U/L.[结论]本研究成功构建了敲除菌株ΔmsbB和ΔwaaF,ΔmsbB能明显增强β-FFase的胞外分泌,而ΔwaaF对β-FFase和PGA的胞外分泌均有显著的强化作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何冰芳	南京工业大学生物与制药工程学院	91	785	14.0	24.0
5	朱芸	南京工业大学生物与制药工程学院	14	27	2.0	4.0
6	储建林	南京工业大学生物与制药工程学院	2	2	1.0	1.0
7	周有治	南京工业大学生物与制药工程学院	1	1	1.0	1.0