结核分枝杆菌85B基因原核表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 朱岩昆 李辉 王少华 石洁 邢进 马晓光
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 结核分枝杆菌 85B基因 抗原85B 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（15）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2449-2452
• 页数: 4页
• 分类号: S854.43
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达结核分枝杆菌85B融合蛋白,建立该抗原对结核病患者诊断的ELISA方法.方法 制备结核分枝杆菌基因组DNA,从结核分枝杆菌H37Rv基因组中进行PCR扩增85B基因并构建至表达载体pGEX4T-1上.原核表达GST-85B融合蛋白,并通过包涵体对其进行变性和透析复性后,进行GST亲和层析纯化得到可溶性的目的蛋白.用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析重组蛋白,ELISA检测表达融合蛋白的抗原性.结果 扩增出了结核分枝杆菌85B基因,构建了具有正确基因序列的质粒载体pGEX4T-85B,转化大肠杆菌BL21后经诱导产生了高水平的表达产物.超声裂菌法分离的结果显示,目的蛋白在菌体沉淀中以包涵体形式居多.将包涵体变性、复性后用GST亲和层析纯化,蛋白纯化后可被结核病患者血清特异性识别.结论 构建了质粒载体,并诱导表达了GST-85B融合蛋白,为进一步研究结核菌的免疫机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李辉		8	0	0.0	0.0
2	马晓光		7	0	0.0	0.0
3	石洁		3	0	0.0	0.0
4	朱岩昆		5	0	0.0	0.0
5	王少华		4	0	0.0	0.0
6	邢进		6	0	0.0	0.0