鸭 RLRs 和 IFN 基因 SYBR GREENⅠ实时荧光定量PCR 检测方法的建立

• 作者: 万春和 傅光华 傅秋玲 施少华 程龙飞 陈红梅 陈翠腾 黄瑜
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: RIG-I 样受体 干扰素 实时荧光定量 PCR
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 209-215
• 页数: 7页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4594字
• 语种: 中文

摘要

首次建立以 GAPDH 为内参，同时检测鸭 RIG-I 、MDA5、IFN-α和 IFN-γ等4种 mRNA 相对表达量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 方法（RT-FQ-PCR）。以目的基因的克隆质粒为标准品，建立标准曲线，并进行熔解曲线、重复性及稳定性分析。该方法 Ct 值线性范围为12．0～32．0；目的基因（RIG-I 、MDA5、IFN-α、IFN-γ）和内参基因（GAPDH）的扩增效率均在95％～105％，其相关系数均在0．99以上；扩增产物的熔解曲线都只出现1个特异性单峰，无引物二聚体或其他非特异性产物生成，RIG-I 、MDA5、IFN-α、IFN-γ和 GAPDH 的 Tm 值依次为（81．9±0．33）、（81．9±0．32）、（93．6±0．23）、（81．8±0．28）、（87．8±0．24）℃，其敏感度均达到100 copies·μL－1，重复性和稳定性好，为从 mRNA 水平上深入研究 RIG-I 样受体、干扰素与鸭机体免疫功能相关性奠定了基础。