HJURP基因缺陷表达的人胚胎绒毛细胞模型的构建与鉴定

• 作者: 卢洪涌 周岩 孙夏瑜 张玉萍 朱镭 燕美琴 祁春茹 薛慧琴 高庭
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人类胚胎绒毛细胞 HJURP RNA干扰 慢病毒
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 分子遗传学与生化遗传学
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 分类号: R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建HJURP基因的RNA干扰慢病毒表达载体并在人胚胎绒毛细胞上鉴定其沉默效率,进而提供HJURP基因缺陷表达的原代胚胎绒毛细胞模型.方法 针对目的基因HJURP的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计合成3个HJURP基因特异性的小分子干扰RNAi靶点,将其合成短发夹RNA (shRNA)并退火形成双链RNA,克隆至慢病毒载体中形成shRNA表达载体,通过PCR和测序鉴定获取正确重组载体.将筛选出的重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度.随后将其干扰人胚胎绒毛细胞,采用Western blotting和real-Time PCR检测靶基因的沉默效率.结果 对重组载体pHBLV-U6-ZsGreen-Puro进行测序鉴定,证实插入的shRNA序列无碱基变异.重组慢病毒载体经293T细胞包装后,病毒滴度为108PFU/ml.RNA干扰人胚胎绒毛细胞HJURP基因后,可见感染后内源HJURP的蛋白表达水平显著下降,HJURP mRNA水平明显下降,其中shRNA1干扰效率大于70％.结论 成功构建了HJURP基因的shRNA慢病毒表达载体,该重组载体可以在细胞水平有效沉默靶基因,为后续研究HJURP基因表达抑制对人胚胎绒毛细胞的增殖凋亡和染色体分离的影响,探索HJURP基因在自然流产发生中的作用机制提供细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱镭		44	133	6.0	9.0
2	祁春茹		21	29	3.0	4.0
3	燕美琴		11	62	4.0	7.0
4	周岩		11	2	1.0	1.0
5	孙夏瑜		10	5	1.0	2.0
6	薛慧琴		13	8	2.0	2.0
7	卢洪涌		7	0	0.0	0.0
8	张玉萍		3	5	1.0	2.0
9	高庭		2	0	0.0	0.0