稳定抑制PAK2蛋白表达的HUH-7细胞株的建立

• 作者: 于庆功 朴莲淑 王福光 王迎春 王飞
• 来源期刊: 中国医药导报
• 学科: 医学
• 关键词: PAK2 原发性肝癌 RNA干扰 HUH-7
• 年，卷（期）: 2015,（27）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-17
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 2818字
• 语种: 中文

摘要

目的：为研究细胞周期相关因子PAK2在原发性肝癌中的作用,拟用shRNA干扰技术建立稳定抑制PAK2蛋白表达的HUH-7肝癌细胞系。方法用基因转染技术将人PAK2的3个shRNA片段分别克隆至慢病毒载体pHBLV-U6-ZsGreen-Puro,包装成病毒后利用脂质体将载体病毒转染至HUH-7细胞,利用G418筛选稳定表达shRNA的细胞。利用Real-time PCR和Western blotting方法分别鉴定转染细胞内PAK2的RNA及蛋白表达水平。结果 sh1-PAK2 HUH-7、sh2-PAK2 HUH-7和sh3-PAK2病毒载体均可转染至HUH-7细胞系,且转染效率较高(跃80%)。Real time-PCR结果显示,与对照组sh-cont比较,转染sh1-PAK2、sh2-PAK2和sh3-PAK可明显抑制HUH-7细胞内PAK2-mRNA的表达,差异均有统计学意义(均P<0.05),其中sh2-PAK2和sh3-PAK2的干扰效果尤为明显,下调效率分别达68%和89%。 Western blotting结果显示,转染sh3-PKA2细胞内PAK2的蛋白表达量较对照组sh-cont明显下调,其表达量为对照组sh-cont的14.4%。结论稳定抑制PAK2基因表达的肝癌细胞系shPAK2 HUH-7的建立为PAK2在肝癌细胞中的作用机制研究奠定细胞基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王福光	大连大学附属中山医院消化内科	9	20	3.0	4.0
2	于庆功	大连大学附属中山医院消化内科	45	120	6.0	8.0
3	王迎春	大连大学附属中山医院消化内科	23	52	4.0	5.0
4	王飞	大连大学附属中山医院消化内科	19	76	5.0	8.0
5	朴莲淑	大连大学附属中山医院消化内科	8	4	1.0	1.0