米根霉AS3.819基因启动子片段的克隆及功能鉴定

• 作者: 吴学凤 姜绍通 张旻 李兴江 潘丽军 罗水忠 郑志
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 米根霉 大肠杆菌 启动子探针载体 β-内酰胺酶 乳酸脱氢酶
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 71-78
• 页数: 8页
• 分类号: Q789
• 字数: 7871字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201507014

摘要

从L-乳酸生产菌米根霉(Rhizopus oryzae)菌株AS 3.819基因组DNA中分别扩增得到了乳酸脱氢酶基因(ldhA)、丙酮酸脱氢酶基因(pdcA)、淀粉糖化酶基因(amyA)以及磷酸甘油酸酯激酶基因(pgk1)的启动子片段,并构建启动子探针载体pUKMR,以β-内酰胺酶基因(bla)为报告基因在大肠杆菌JM109中对这些启动子片段进行筛选及启动活性检测.结果表明:4种启动子片段成功启动报告基因表达;在非底物诱导情况下,ldhA和pgk1启动子启动活性较强;在有合适碳源底物诱导情况下pdcA和amyA启动子拥有更高的启动活性;ldhA基因的启动子启动活性随着启动子片段长度的增加有一定提高,而在长度为500 bp以上时,其启动活性变化不明显.本研究为Rhizopus oryzae提供了一种快速简便的启动子捕获分离及启动活性检测方法.