hsa-miR-20a低表达慢病毒载体的构建及其表达鉴定

• 作者: 吕运成 张熠 文格波 杨靖 钟警
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: Hsa-miR-20a 慢病毒载体 HL-60
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 804-807
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2015.05.002

摘要

目的:构建hsa-miR-20a低表达慢病毒载体,检测其在HL-60中表达.方法:采用In-fusion重组交换克隆法设计并合成hsa-miR-20a前体序列的扩增引物,扩增获得目的片段插入慢病毒GV159中,得到重组的LV-hsa-miR-20a表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞,获得携带hsa-miR-20a的重组慢病毒并测定病毒滴度.取对数生长期HL-60细胞根据病毒滴度及细胞MOI值感染慢病毒,感染后24h、48 h、72 h、96h镜下观察荧光表达情况,判断感染效率,qRT-PCR检测HL-60细胞hsa-miR-20a的表达变化.结果:成功构建LV-hsa-miR-20a低表达慢病毒载体,其病毒滴度为(8E+8)TU/mL.该病毒感染HL-60细胞的效率可高达到80％,并可有效降低HL-60细胞hsa-miR-20a表达水平.结论:成功构建了hsa-miR-20a低表达慢病毒载体,包被的慢病毒可以在HL-60细胞中实现低表达效果,为后续功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文格波	南华大学附属第一医院临床医学研究所	115	651	12.0	18.0
2	杨靖	南华大学附属第一医院内分泌科	28	121	5.0	10.0
3	钟警	南华大学附属第一医院临床医学研究所	41	152	8.0	10.0
4	吕运成	南华大学人体解剖学教研室	34	148	7.0	10.0
5	张熠	南华大学附属第一医院内分泌科	5	7	1.0	2.0