建鲤组织蛋白酶L的克隆表达、纯化及活性特征鉴定

• 作者: 但静 李冉 李新 李树红 蒋然然 钟海霞 陈治光 陈秀华
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 建鲤 组织蛋白酶L 克隆表达 纯化 活性特征
• 年，卷（期）: 2015,（18）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 233-237,247
• 分类号: TS201.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2015.18.038

摘要

首先采用TA克隆技术克隆建鲤组织蛋白酶L(Cathepsin L,CAT L)成熟肽基因片段并进行双酶切鉴定,进而构建表达载体CAT L-pET-30a并转入宿主菌E.coli BL21,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)在37℃诱导2h表达重组CAT L蛋白.而后经尿素梯度洗涤和镍离子亲和层析纯化目的蛋白,并利用SDS-PAGE检测诱导效果和纯化过程.最后以荧光合成肽底物(Z-Phe-Arg-MCA)测活法鉴定建鲤重组CAT L的热稳定性、pH稳定性,以及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对其活性稳定性的影响.双酶切鉴定结果表明成功克隆了目的基因片段,与鲤鱼CAT L基因序列相似性为99.11％.SDS-PAGE分析表明经诱导、尿素梯度洗涤及亲和层析后,成功获得高度纯化目的蛋白,分子量约28 ku.活性鉴定结果表明重组CAT L在20～50℃及pH3.0～6.5范围内稳定;氯化钠、焦磷酸钠对重组CAT L活性的抑制作用呈现剂量依赖关系,而各浓度蔗糖、山梨醇则对其活性无明显作用.本研究成功克隆、表达和纯化了建鲤CAT L,并阐明了热、pH及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对该酶稳定性的不同影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李树红	四川农业大学食品学院	25	58	5.0	7.0
2	李冉	四川农业大学食品学院	15	21	3.0	4.0
3	钟海霞	四川农业大学食品学院	13	5	1.0	1.0
4	蒋然然	四川农业大学食品学院	10	10	2.0	3.0
5	陈治光	四川农业大学食品学院	8	6	2.0	2.0
6	李新	四川农业大学食品学院	2	3	1.0	1.0
7	但静	四川农业大学食品学院	5	12	2.0	3.0
8	陈秀华	四川农业大学食品学院	3	3	1.0	1.0