建鲤组织蛋白酶L的原核表达、纯化鉴定及多克隆抗体的制备

• 作者: 李冉 李新 李松 李树红 李美良 蒋然然 陈志光 陈秀华 马璐阳
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 组织蛋白酶L 原核表达 纯化 鉴定 多克隆抗体 免疫组化
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 849-857
• 页数: 9页
• 分类号: S965.1|TS254.1
• 字数: 5108字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2015.15040

摘要

对原核表达的重组建鲤组织蛋白酶L(Cathepsin L, CAT L)蛋白进行尿素洗涤和Ni-NTA亲和层析纯化,该目的蛋白经300 mmol/L咪唑洗脱为单一峰, SDS-PAGE结合TSK-GEL G2000SWxl凝胶过滤高效液相色谱分析表明重组CAT L获得了高度纯化,分子量约28 kD,纯度超过95%。Z-Phe-Arg-MCA底物测活法显示该重组CAT L表现为半胱氨酸蛋白酶活性,能与其内源抑制因子 Cystatin以1︰1的摩尔比结合,具有生物学活性。以纯化的重组CAT L 蛋白免疫 Balb/C 小鼠获得抗血清,经 ELISA 法检测获得的 CAT L 抗血清效价高于1︰512000； Western blotting 鉴定结果表明该抗体具有良好的特异性,能够识别原核表达的重组 CAT L 蛋白。免疫组织化学分析结果表明,该抗体还能识别建鲤小肠、肝胰脏、脾、背肌和心肌组织表达的内源性CAT L蛋白。因此可利用该抗体从蛋白水平检测CAT L在鱼类不同组织中的表达和分布情况。