N端截短对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶酶学特性及功能的影响

• 作者: 刘秀霞 彭枫 戴晓峰 李松 李璐 杨艳坤 王芬 詹锦玲 陈阿娜
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: N端截短 普鲁兰酶 表达水平 酶学特性 应用
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 355-364
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150322

摘要

采用N端截短方式对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌Bacillus acidopullulyticus普鲁兰酶进行分子精简,构建不同形式的N端截短突变体,考察截短突变对表达水平、酶学特性及实用性能的影响.研究结果表明:缺失X45后,目标蛋白几乎全部以不溶形式的包涵体形式存在;缺失CBM41可引起可溶性表达量的大幅提升.缺失CBM41 (M1)、X25 (M3)、亦或两结构域同时缺失(M5)的变体最适温度(60℃)和最适pH (5.0)与野生型相同.突变体M1和M5的Kn值分别提高至野生型的2.4倍和3.1倍,kcat/Km测定结果显示M5催化效率下降明显.突变体M1、M3和M5对分子量较大底物的水解效率略有下降,但对小分子底物的水解效率影响不明显.野生型及突变体M1、M3和M5与糖化酶复配使用时,糖化值(DE)分别为93.6％、94.7％、94.5％和93.1％.上述结果表明,切除CBM41和/或X25结构域的普鲁兰酶变体不影响其在淀粉糖化过程中的应用,且由于分子量减小更易于异源表达,截短突变体可能更适合于工业化生产.