Thermotoga petrophila普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析

• 作者: 孙利鹏 王明道 聂慧慧 邢岩 邱爽 邱立友
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 超嗜热菌 普鲁兰酶 Thermotoga petrophila 异源表达 酶学性质分析
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 404-411,423
• 页数: 9页
• 分类号: Q556.2
• 字数: 3964字
• 语种: 中文

摘要

通过生物信息学筛选出来源于超嗜热菌Thermotoga petrophila(DSM13995)的普鲁兰酶基因,以从德国菌种保藏中心购买的基因组作为出发材料,克隆出普鲁兰酶基因TP-pulA;通过二步PCR方法构建含有该嗜热普鲁兰酶基因的载体pET21a-TP-pulA;将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中测定其酶学性质.结果表明,TP-pulA为Ⅰ型普鲁兰酶,最适pH值为6.4,最适温度是85 ℃,半衰期为26.28 h,Na+、K+、Ca2+、Mg2+对其酶活性有明显的促进作用,Mn2+、Co2+、AL3+、Fe3+、SDS及EDTA对酶活性有不同程度的抑制作用,Km、Vmax、Kcat及Kcat/Km值分别为0.72 g·L-1、0.004 9 mmol·L-1·s-1、154.63 s-1、214.76 L·g-1·s-1.本研究采用的生物信息学方法比传统的筛菌方法简单方便耗时短,且获得的嗜热普鲁兰酶的热稳定性好、催化效率高、对普鲁兰糖有较强的底物亲和能力,具有良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱立友	河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室	89	983	20.0	27.0
2	聂慧慧	河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室	4	3	1.0	1.0
3	邢岩	河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室	4	2	1.0	1.0
4	邱爽	河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室	2	0	0.0	0.0