产酸克雷伯氏菌M5al普鲁兰酶的异源表达及酶学性质研究

• 作者: 关锋 温亮亮 郭佳
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 产酸克雷伯氏菌 普鲁兰酶 异源表达 蛋白纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 36-42
• 页数: 7页
• 字数: 4558字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2015.01.007

摘要

普鲁兰酶（EC 3．2．1．41）是一类淀粉脱支酶，能够特异性水解淀粉中的α-1，6-糖苷键，从而提高淀粉的利用率，在以淀粉为原料的食品、纺织、生物燃料和洗涤剂等行业中具有重要的应用价值。本研究以产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca M5 al基因组DNA为模板，将PCR扩增得到的普鲁兰酶基因pulA克隆至表达载体pET28 a （＋），构建好的重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3），在培养基中添加0．5 mmol／L异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的条件下对该酶基因进行诱导表达，经镍柱纯化获得重组普鲁兰酶用于酶学性质研究。SDS-PAGE及Western Blot检测显示普鲁兰酶基因pulA在上述大肠杆菌宿主中成功获得了表达。该重组酶最适反应pH5 ．5 ，最适温度60℃。金属离子对酶活性有一定影响。Mn2＋对酶活促进作用显著；Fe3＋、Mg2＋、Fe2＋对酶活只有微弱的促进作用，而Cu2＋对酶活造成强烈抑制。来源于Klebsiella oxytoca M5al的普鲁兰酶最适催化条件符合工业生产中淀粉糖化工艺的要求，具有应用于淀粉工业的潜力。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关锋	江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室	25	47	4.0	5.0
2	郭佳	江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室	13	8	2.0	2.0
3	温亮亮	江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0