高效hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能的研究

• 作者: 李瑞明 杞少华 梁清乐 王晓勋
• 来源期刊: 分子诊断与治疗杂志
• 关键词: 蛋白转导域 人铜锌超氧化物歧化酶 生物膜 原核表达载体 内化作用
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 88-93
• 页数: 6页
• 字数: 4723字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能. 方法 首先,人工设计合成蛋白转导域序列(protein transduction domain,PTD),以人胚肝组织的总RNA为模板,逆转录扩增得人铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA序列.其次,将此序列及人工合成PTD序列定向插入pET16b载体;测序鉴定后,将构建成功的重组载体导入E coli BL21菌株,异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,经镍柱纯化,洗脱液经SDS-PAGE检测.最后,将纯化产物与食管癌细胞(EC9706)共孵育,用激光共聚焦和流式细胞仪的方法检测蛋白穿膜能力及活性. 结果 测序结果与人铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA序列相符;SDS-PAGE结果出现18.6 kd和20 kd的目的条带;激光共聚焦和流式细胞仪的方法显示蛋白可穿膜且保持活性. 结论 本实验成功构建了PET16b/hCu,Zn-SOD-PTD原核表达质粒,可在大肠杆菌中稳定表达融合蛋白,融合蛋白具有穿膜且保持活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李瑞明	湖北医药学院附属太和医院生物医学研究所	5	24	3.0	4.0
2	王晓勋	湖北医药学院附属太和医院检验部	5	23	3.0	4.0
3	杞少华	湖北医药学院附属太和医院检验部	1	2	1.0	1.0
4	梁清乐	湖北医药学院附属太和医院检验部	3	4	2.0	2.0