妊娠相关血浆蛋白A的原核表达及蛋白纯化

• 作者: 常艳敏 曾昭伟 王学谦
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 妊娠相关血浆蛋白A 抗原表位 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 临床实验研究
• 页码范围: 186-189
• 页数: 4页
• 分类号: R392-33
• 字数: 3397字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2016.03.07

摘要

目的 构建原核表达PAPP-A重组蛋白,并对蛋白质进行纯化.方法 根据DNAstar软件分析获得的编码PAPP-A特异抗原表位,利用Primer Premier 5.0软件设计引物,以PAPP-A cDNA-质粒转化菌液为模板,进行PCR扩增.PAPP-A的DNA和pET42a质粒分别双酶切,经琼脂糖凝胶电泳及胶回收后进行连接反应,转化至大肠埃希菌Top10,筛选阳性克隆经测序鉴定正确后,转化至大肠埃希菌BL21,诱导产生PAPP-A重组蛋白,利用镍柱初步纯化及离子交换层析柱进一步纯化,用SDS-PAGE及DEAE层析鉴定重组抗原蛋白.结果 筛选出抗原表位集中区,在大肠埃希菌BL21中高效表达了重组的PAPP-A蛋白,经过镍柱及离子交换层析纯化后,PAPP-A浓度为0.22 g/L,DEAE层析分析证实其纯度较高.结论 成功筛选出PAPP-A的抗原表位集中区,并制备了重组抗原蛋白,为PAPP-A的后续临床研究提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常艳敏	天津市南开医院检验科	40	154	6.0	10.0
2	曾昭伟	天津市南开医院检验科	11	20	3.0	4.0
3	王学谦	天津市南开医院检验科	3	10	1.0	3.0