犬细小病毒SH14株VP2基因原核表达及免疫原性分析

• 作者: 丁明洋 刘光清 唐井玉 宫晓华 李传峰 李琦 王桂军 陈宗艳
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬细小病毒 VP2基因 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文 -- 病毒
• 页码范围: 38-43
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 3486字
• 语种: 中文

摘要

根据犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV） SH14株基因序列设计引物，采用PCR方法扩增CPV VP2基因，经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后，将其克隆至pGEX-4T-1载体，构建重组表达载体pGEX-4T-VP2，经酶切鉴定和测序验证正确后转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达，应用SDS-PAGE法检测蛋白的表达。然后，使用纯化的重组VP2蛋白制备其兔源多克隆抗体，分别应用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光检测该抗体的免疫原性。结果表明，pGEX-4T-VP2能在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达，所制备的兔抗CPV-VP2抗体能与重组蛋白和病毒蛋白发生特异性反应。本研究为研发CPV亚单位疫苗、检测技术及致病机理研究等奠定了物质基础。