猪流感病毒新型核糖体移码蛋白PA-X特有序列的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 于海 刘晓敏 周艳君 宫晓倩 张鹏 李泽君 汪琪 汪秀会 童光志 童武 郑浩 阮宝阳
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 PA-X特有序列 原核表达 蛋白纯化 Western blot
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文 -- 病毒
• 页码范围: 32-37
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 4003字
• 语种: 中文

摘要

核糖体移码蛋白PA-X是流感病毒的一种新型蛋白，为了研究该蛋白对于猪流感病毒的生物学特性的影响，我们进行了PA-X特有序列的原核表达、蛋白纯化及其鉴定。通过RT-PCR和重叠PCR方法扩增PA-X特有序列的基因，利用基因重组技术构建原核表达载体，并进行菌液PCR和菌液测序鉴定，鉴定正确后克隆转化到BL21（DE3）中，进行蛋白表达及可溶性分析，同时用镍柱亲和层析法对其进行纯化。通过菌液PCR序列鉴定，PA-X特有序列的原核表达载体序列正确，编码框正确。转化BL21后目的蛋白表达成功，且大多数为可溶性蛋白。Western blot结果表明制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应性。