葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质

• 作者: 杨家兴 王华明 路福平
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: β-甘露聚糖酶 葡萄穗霉 黑曲霉 遗传转化 重组蛋白表达
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1242-1255
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150490

摘要

[目的]以黑曲霉(Aspergillus niger)为宿主菌来表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)中的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)基因.[方法]通过对葡萄穗霉全基因组进行比对分析,获得编码β-甘露聚糖酶基因s16942和s331的序列信息,通过设计引物,PCR扩增得到基因s16942和s331,连接到载体pGm上,并转化到黑曲霉中,获得的转化子经过amdS二筛平板复筛,测序验证,得到高效表达此基因的工程菌株G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331. [结果]SDS-PAGE检测结果显示,G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331表达的蛋白分子量大小分别约为48 kDa和60 kDa,且阴性对照中没有此条带.粗酶液的酶学性质表明,G1-pGm-s16942表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达521 U/mL;G1-pGm-s331表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达84 U/mL.[结论]本研究首次将葡萄穗霉的β-甘露聚糖酶基因转化到黑曲霉中并成功表达,并且具有较高的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	路福平	天津科技大学生物工程学院	184	1421	20.0	27.0
2	王华明	中国科学院天津工业生物技术研究所	17	137	8.0	11.0
3	杨家兴	天津科技大学生物工程学院	1	4	1.0	1.0