小麦TaPBFB蛋白的原核表达及与顺式元件的结合

• 作者: 刘缙 滕红梅 王亚红 王玉国
• 来源期刊: 植物生理学报
• 关键词: 小麦 转录因子 克隆 原核表达 凝胶阻滞
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1081-1088
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

为进一步了解小麦Dof (DNA binding with one figner)转录因子在小麦种子发育过程中的作用和功能,本文利用RT-PCR技术,克隆到一个小麦PBF蛋白的等位基因cDNA序列(GenBank登录号为KX058135),命名为TaPBFB。该序列包含完整的开放阅读框(ORF)987 bp,编码了328个氨基酸的蛋白质,理论等电点8.75,理论分子量为33.9 kDa,这与原核表达后SDS-PAGE和Werstern blot检测结果一致。蛋白质序列分析表明,该基因编码的氨基酸序列与粗山羊草(Aegilops tauschii, AHZ44510) AtaPBF蛋白相似性最高为92%,而与已知的‘中国春’小麦(Triticum aestivum, AGR34055) WPBF蛋白相比同源性为91.5%。保守结构域分析表明,该蛋白中具有典型的Dof结构域,以及NLS核定位信号,推测该蛋白定位于细胞核并具有调控储藏蛋白基因表达的功能。凝胶阻滞实验结果也表明,融合蛋白能与小麦低分子量麦谷蛋白GluD-LMWGS基因上游的顺式元件Prolamin box (PB)特异结合,证明TaPBFB具有DNA结合活性。这为深入研究多个等位基因的小麦PBF转录因子如何共同调控储藏蛋白的表达机制提供研究材料,为进一步在转录调控水平实现农作物的遗传改良奠定基础。