骨形成蛋白10成熟肽在大肠杆菌中的表达纯化及活性分析

• 作者: 李文军 郑雄飞 金坚 龚笑海
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨形成蛋白10 包涵体 亲和层析 透析复性 活性检测
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 488-491
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3083字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.04.006

摘要

目的:以生物制备骨形成蛋白10(BMP10)为目标,研究BMP10成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性.方法:以人源BMP10成熟肽基因为模板,PCR获得N端带有组氨酸标签(6×His)的融合基因6×His-mBMP10,构建pET28a/mBMP 10表达载体;热击转染大肠杆菌BL21 (DE3)菌株,卡那霉素抗性筛选获得重组表达菌株BL21/pET28a-6×HismBMP10,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳、Western印迹对蛋白进行分析;超声波破碎菌体,收集包涵体,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯目的蛋白;透析复性后,非还原SDS-PAGE检验目标蛋白的二聚体形成;通过体外细胞实验检测蛋白活性.结果:纯化得到纯度90％以上的mBMP10,复性后二聚体得率约为40％;活性实验测得P19细胞的Smad6蛋白表达上调3倍左右.结论:通过大肠杆菌表达体系获得具有生物活性的BMP10,为后续作用机理研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金坚	江南大学药学院	196	1025	16.0	22.0
2	龚笑海	江南大学药学院	7	5	1.0	2.0
3	李文军	江南大学药学院	2	1	1.0	1.0
4	郑雄飞	江南大学药学院	2	1	1.0	1.0