刺激隐核虫小GTP酶Ran基因的克隆与表达

• 作者: 付国良 晏燕花 胡燕红 谢金珠 黄晓红 黄玛娇 黄镇
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 刺激隐核虫 小GTP酶Ran 克隆 表达 分析
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 672-681
• 页数: 10页
• 分类号: S941.5
• 字数: 8042字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.15208

摘要

对刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)的小GTP酶Ran基因(CiRan)进行研究,以期为刺激隐核虫病原生物学研究及其防治提供理论基础。从刺激隐核虫滋养体/包囊前期cDNA文库中筛选出CiRan基因的克隆,利用生物信息学方法对CiRan基因及其编码的蛋白进行结构与功能的预测；通过逆转录PCR检测CiRan的mRNA。结果表明其在刺激隐核虫的各个发育阶段均有表达。对 CiRan 基因开放阅读框内的非通用密码子进行改造,并构建重组质粒pGEX-4T-1/CiRan,将其转化到大肠杆菌(E. coli)后成功表达分子量为51.3 kD的重组融合蛋白rCiRan。用rCiRan蛋白免疫鼠血清进行免疫印迹分析,结果表明,抗 rCiRan 血清能识别刺激隐核虫各期虫体的天然 CiRan 蛋白,其表观分子量为25.3 kD,与根据编码基因序列推测出的理论值相符；以rCiRan的抗血清做间接免疫荧光抗体实验,结果表明天然CiRan蛋白在幼虫的细胞质和细胞核内均有分布,且在核膜周围富集,佐证了该分子潜在的功能。