刺激隐核虫α-微管蛋白基因的克隆、原核表达及在生活史不同阶段的mRNA表达

• 作者: 孙嘉阳 张子平 朱友芳 王艺磊 葛辉 邹志华 韩坤煌
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 刺激隐核虫 α-微管蛋白 原核表达 生活史 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1172-1182
• 页数: 11页
• 分类号: S917
• 字数: 7040字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17439

摘要

从本实验室已有刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)转录组数据中筛选获得α-微管蛋白基因片段,利用5'RACE和3'RACE技术首次克隆获得其cDNA,全长为1602bp,包含1356bp的开放阅读框,编码451个氨基酸,预测蛋白质分子量为49.78 kD.生物信息学分析表明α-微管蛋白为亲水性非跨膜蛋白,氨基酸序列的第142～148位有特异且保守的GTP核苷酸结合位点(GGGTGSG).对刺激隐核虫α-微管蛋白氨基酸序列进行同源性比对及进化树分析,发现其与间日疟原虫(Trypanosoma vivax)、丹氏锥虫(Trypanosoma danilewskyi)、八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)、尾刺耐格里原虫(Naegleria gruberi)、眼虫(Euglena gracilis)等的序列一致性高达94％～95％,且在系统进化树上聚为一支.采用实时荧光定量PCR技术对α-微管蛋白基因在刺激隐核虫3个生活史阶段的表达进行检测,结果显示α-微管蛋白基因的表达量在纤毛虫时期显著高于包囊和滋养体时期(P＜0.05).我们进一步构建了α-微管蛋白重组表达载体,并转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE分析表明,诱导表达的重组蛋白分子量约为50 kD,与预测的结果一致,即成功诱导表达α-微管蛋白.本实验结果为后续制备α-微管蛋白有效亚单位疫苗防治刺激隐核虫病奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王艺磊	集美大学水产学院	80	1300	17.0	35.0
2	葛辉		18	93	6.0	9.0
3	邹志华	集美大学水产学院	22	117	6.0	10.0
4	韩坤煌	集美大学水产学院	8	26	2.0	5.0
5	孙嘉阳	集美大学水产学院	1	0	0.0	0.0
6	张子平	福建农林大学动物科学学院	12	11	2.0	2.0
7	朱友芳		10	79	5.0	8.0