重组慢病毒CD133-miR30-shRNA的构建及抗肝癌细胞生长的作用

• 作者: 刘斌 牛坚 王月
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: 肝肿瘤 干细胞 CD133 细胞增殖 基因表达 慢病毒
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1571-1574
• 页数: 4页
• 字数: 1926字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2016.10.006

摘要

目的：构建沉默CD133基因的miR30-CD133慢病毒，探讨其对肝癌细胞株SMMC7721生物学行为的影响。方法：针对已经筛选确定的 CD133基因干扰有效序列，合成靶序列的 Oligo DNA ，与 pPRIME 载体连接。用 pPRIME-miR30-CD133、psPAX2和 pMD2G 3种质粒共转染293T 细胞，包装产生慢病毒，测定病毒滴度；荧光显微镜下测定病毒感染效率；qRT-PCR、Western blot 检测 CD133表达；CCK-8法检测细胞生长；annexinV／PI检测细胞凋亡。根据实验要求（1）Blank组；（2）shNC组；（3）shCD133组。结果：病毒滴度为6．58×109 PFU／mL，病毒感染效率为（80．8±9．1）％。 qRT-PCR结果显示sh CD133组相对Blank 组的CD133表达量的平均值为0．18±0．04，sh CD133组相对Blank 组和shNC 组有显著的 CD133敲减作用（P ＜0．05）。 Western blot结果显示sh CD133组的CD133表达明显下降，约为shNC组的10％（P ＜0．05）和Blank组的8％（P ＜0．05）。重组慢病毒抑制肝癌细胞生长，与Blank 组（25．3％）、shNC 组（24．3％）相比，sh CD133组凋亡细胞比例（41．3％）显著增加（P ＜0．05）。结论：成功构建慢病毒PRIME-miR30-CD133，为CD133基因的功能研究提供了工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘斌	徐州医学院附属医院普外科	85	312	8.0	12.0
2	牛坚	徐州医学院附属医院普外科	48	241	8.0	12.0
3	王月	徐州医学院附属医院普外科	12	36	4.0	5.0