UQCRB 基因的原核表达和纯化

• 作者: 孙砚辉 张广献 张晓圆 张韧 邝枣园
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: UQCRB 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3450字
• 语种: 中文

摘要

目的：为研究 UQCRB（ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein）与中药的作用机制，本实验室进行了 UQCRB 基因的克隆、原核表达和纯化。方法提取人肝癌 SMMC-7721细胞总 RNA，反转录后采用特异引物进行 PCR 扩增获取 UQCRB 基因全长，产物纯化后连入 T 载体测定正确，克隆经 NheI、XhoI 双酶切后连入 PET28a （＋）载体，构建 PET28a（＋）-UQCRB 原核表达质粒。在 BL21（DE3）宿主菌中表达超声处理后，应用 Amicon ? Pro Affinity Concentration Kit-Ni-NTA 纯化，表达及纯化产物用 westernblot 验证。结果构建了 PET28a（＋）-UQCRB表达质粒，经过酶切鉴定和测序鉴定正确。重组 UQCRB 在 BL21（DE3）中的最优表达条件为 IPTG 1mM 诱导5 h。Westernblot 证实了表达和纯化结果。结论重组 UQCRB 的原核表达和纯化成功，为进一步研究 UQCRB 的作用奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邝枣园	广州中医药大学基础医学院生化教研室	96	1268	23.0	31.0
2	张广献	广州中医药大学基础医学院生化教研室	21	65	4.0	7.0
3	孙砚辉	广州中医药大学基础医学院生化教研室	9	143	4.0	9.0
4	张韧	广州中医药大学基础医学院生化教研室	32	120	7.0	10.0
5	张晓圆	广州中医药大学基础医学院生化教研室	1	0	0.0	0.0