Pseudomonas plecoglossicida NyZ12基因无痕敲除方法的建立

• 作者: 李存治 毛灵琪 闫达中
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 基因敲除 自杀载体 同源重组 结合转移
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 203-209
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.04.027

摘要

旨在建立一种适合环己胺降解菌NyZ12基因无痕敲除的可靠方法。通过overlapping PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pEX18km上，将重组质粒转化到大肠杆菌S17 pir中，再通过接合转移到假单胞菌NyZ12菌株内，经pEX18km质粒上sacB基因的反向筛选得到突变株并通过PCR方法和测序鉴定。结果显示，成功构建了假单胞菌NyZ12菌株orf4637的基因突变株（NyZ12Δ4637）。通过自杀载体同源重组可以成功获得敲除的无痕突变株，且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留，为环己胺降解菌NyZ12基因功能研究提供了可靠的基因敲除技术。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫达中	武汉轻工大学生物与制药工程学院	12	5	1.0	2.0
2	李存治	武汉轻工大学生物与制药工程学院	6	4	1.0	2.0
3	毛灵琪	武汉轻工大学生物与制药工程学院	6	4	1.0	2.0