在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段

• 作者: 徐玲玲 李海娟
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬热栖热菌 多倍体 基因无痕敲除手段
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术与工程
• 页码范围: 577-583
• 页数: 7页
• 分类号: Q812
• 字数: 4561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13836/j.jjau.2019067

摘要

噬热栖热菌(Thermus thermophilus)是多倍体,在基因敲除过程中,可形成同时含有突变型和野生型等位基因的杂合子,在无选择压力下,杂合子会转化成只含有其中一种等位基因的纯合子.利用此原理,在T.thermophilus中开发了一种新的基因无痕敲除手段,基本方案是:将目的基因的上下游DNA序列克隆到pUC18载体后转化T.thermophilus,将转化混合物涂布在无筛选的平板上;混合池法提取96个单菌落的基因组DNA,PCR鉴定出含有突变型等位基因的菌株;将该杂合型突变菌株在无筛选条件下培养后(使杂合子纯合化)涂板,通过PCR法从单菌落中鉴定出纯合的基因无痕敲除突变株.利用该系统成功敲除了T.thermophilus的TTC0340_0341基因,获得突变体的概率达到了10-2.该方法最显著优点是无需任何筛选标记、能在野生型遗传背景下使用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐玲玲	西安文理学院生物与环境工程学院	21	61	3.0	7.0
2	李海娟	西安文理学院生物与环境工程学院	6	2	1.0	1.0