拟态弧菌VMH蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

• 作者: 周昊 孔令严 曹际 李槿年 肖宁 陶丽寒 陶会竹
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 拟态弧菌 VMH蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 770-774
• 分类号: R378.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201607006

摘要

目的 实现拟态弧菌热不稳定性溶血素(VMH)的原核表达,制备兔抗VMH蛋白的多克隆抗体.方法 根据GenBank上已有的拟态弧菌vmh基因序列,设计并合成引物,通过PCR方法扩增vmh基因.PCR纯化产物酶切后,定向插入到PET-32a表达载体构建重组表达质粒PET-32a-vmh.重组表达质粒转化至E.coli Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下进行VMH蛋白表达.SDS-PAGE分析重组VMH蛋白(rVMH)的表达形式,并分别采用兔血平板扩散法和Western blot检测其溶血活性和免疫反应性.用纯化的rVMH蛋白免疫新西兰大白兔,3次免疫后采集免疫血清,采用饱和硫酸铵分级沉淀结合亲和层析法纯化多克隆抗体,并检测其纯度与效价.结果 重组表达质粒PET-32a-vmh诱导表达后,经SDS-PAGE分析发现分子量约为77.8 kDa的rVMH蛋白主要以包涵体形式表达,该蛋白经变性复性后具有溶血活性和免疫反应性.兔抗rVMH蛋白的多克隆抗体经纯化后,其纯度达95％,ELISA效价为1∶26843545600,琼扩效价为1∶32.结论 成功制备了rVMH蛋白及其多克隆抗体,为进一步采用噬菌体肽库筛选技术鉴定VMH蛋白表位提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李槿年	安徽农业大学动物科技学院	98	829	15.0	23.0
2	陶丽寒	安徽农业大学动物科技学院	2	2	1.0	1.0
3	陶会竹	安徽农业大学动物科技学院	5	4	1.0	1.0
4	曹际	安徽农业大学动物科技学院	4	12	2.0	3.0
5	肖宁	安徽农业大学动物科技学院	4	5	1.0	1.0
6	孔令严	安徽农业大学动物科技学院	2	7	2.0	2.0
7	周昊	安徽农业大学动物科技学院	2	2	1.0	1.0