表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性

• 作者: 云涛 余斌 倪征 华炯钢 叶伟成 张存 陈柳
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 鸭瘟病毒 鹅细小病毒 VP2 重组病毒
• 年，卷（期）: 2016,（14）
• 所属期刊栏目: 专题:水禽传染病
• 页码范围: 2813-2821
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.14.015

摘要

[目的]鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗.根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的c疱疹病毒亚科马立克氏病毒属.疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究,而近几年也有关于鸭瘟病毒(DEV)作为疫苗活载体的报道.为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段,本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上,构建表达小鹅瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重组病毒rDEV-VP2,并研究其生物学特性,进而探讨重组病毒rDEV-VP2作为防治DEV和GPV的二联重组活载体疫苗的可能性.[方法]将密码子优化的GPV VP2基因通过常规基因克隆的方法插入转移载体pEP-BGH-end,构建含有GPV VP2表达框pCMV-VP2-BGH-pA的重组表达质粒.在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,通过“Red E/T”两步重组法将GPV VP2基因表达框插入到DEV US7和US8基因之间构建了突变体克隆pDEV-VP2.利用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得重组病毒rDEV-VP2和删除Bac质粒序列的rDEV-VP2-Cre,并对重组病毒细胞体外生长曲线、蚀斑大小和VP2蛋白表达情况进行测定.将rDEV-VP2接种番鸭,在不同时间采集血清,采用间接ELISA法检测血清中GPV VP2抗体产生情况.[结果]间接免疫荧光检测和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs细胞成功表达.病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果显示,rDEV-VP2在CEFs细胞上的增殖滴度与亲本株相比无显著差异,表明外源基因VP2的插入不影响rDEV重组病毒的增殖.动物试验结果表明,7日龄雏番鸭接种rDEV-VP2可以诱导产生针对GPV VP2的抗体,免疫后3周抗体阳性率为50％ (4/8).[结论]将小鹅瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因组的US7和US8基因间构建了表达该免疫原性基因的重组鸭瘟病毒细菌人工染色体,继而在鸡胚成纤维细胞(CEFs)上拯救获得了重组病毒rDEV-VP2,病毒细胞生长特性与亲本株基本一致,且能诱导鸭体产生GPV VP2特异性的抗体.该研究为研制DEV-GPV二联重组活载体疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪征	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	27	169	6.0	12.0
2	云涛	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	28	113	6.0	9.0
3	余斌	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	25	56	5.0	5.0
4	张存	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	42	177	7.0	10.0
5	叶伟成	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	27	143	6.0	10.0
6	华炯钢	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	27	108	6.0	8.0
7	陈柳	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	18	34	4.0	5.0