黑曲霉几丁质合成酶基因chs形态突变株的构建

• 作者: 刘会 孙小雯 赵根海 郑之明 骆家玉
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 黑曲霉 原生质体 RNA干扰 几丁质合成酶 形态突变株
• 年，卷（期）: 2016,（18）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 218-223
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2016.18.033

摘要

以一株产柠檬酸的黑曲霉菌株为研究材料,为了优化菌株的深层发酵形态,提高柠檬酸产量,采用RNA干扰的方法,使与形态建成相关的几丁质合成酶chs基因沉默.首先将酶切得到的chs基因片段与质粒pJL43-RNAi连接,构建成干扰载体.为提高干扰载体的转化率,对原生质体制备、再生和转化条件进行了优化.然后通过聚乙二醇(PEG)介导,将构建的干扰载体导入黑曲霉的原生质体中,经过转化,筛选出形态突变株,并进行深层发酵.结果表明,在36.5 ℃培养16 h的幼嫩菌丝最利于原生质体释放;而5 mg/mL的溶菌酶,10 mg/mL的蜗牛酶和10 mg/mL的纤维素酶组成的混合酶系为最优的酶组合;在30℃下,以100 r/min酶解3h可使原生质体的最大产量达到5.11×106/mL.最优的再生培养基为完全培养基,可以使再生率达到35.33％.获得的3株转化株的chs基因表达量降低,同时在深层发酵过程中,菌球的分支频率降低,分支缩短,离散菌丝减少,柠檬酸产量也分别提高12.33％,24.17％和19.61％.通过分子改造的形态突变株具有良好的产酸性能,对推动柠檬酸发酵工业的进步有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑之明	中国科学院离子束生物工程重点实验室	18	259	5.0	16.0
2	赵根海	中国科学院离子束生物工程重点实验室	2	5	1.0	2.0
3	刘会	中国科学院离子束生物工程重点实验室	6	15	3.0	3.0
4	孙小雯	安徽大学物理与材料科学学院	1	0	0.0	0.0
5	骆家玉		2	4	1.0	2.0