鸡卵清蛋白启动子慢病毒载体构建及荧光定量 PCR 检测重组慢病毒滴度

• 作者: 刘健 吴志鹏 徐宁迎 赵俊生 郭晓令
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡卵清蛋白 慢病毒载体 实时荧光定量PCR 病毒滴度
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 38-39,121
• 页数: 3页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2434字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2016.11.010

摘要

构建鸡卵清蛋白启动子（OV 2．8kb）与含有eGFP基因的慢病毒表达载体，采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测重组慢病毒滴度。将鸡卵清蛋白启动子基因 OV 连接到慢病毒载体pLVshRNA －eGFP中替换质粒上CMV promoter 元件，经酶切、测序鉴定获得携带OV与eGFP融合基因的重组慢病毒质粒，用QPCR检测病毒浓度滴定。结果显示，重组慢病毒质粒pLVshRNA－OV－eGFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合，克隆测序结果与NCBI收录的OV基因序列完全一致。在QPCR试验过程中，发现空白组和载体组的溶解曲线和扩增曲线较好，证明基因组抽提和QPCR过程无问题。最终测得病毒滴度约为1．6×107 IU／mL。成功构建了携带OV与eGFP融合基因的慢病毒表达载体，为进一步研究卵清蛋白启动子基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐宁迎	浙江大学动物科学学院	147	1170	18.0	27.0
2	刘健	浙江大学动物科学学院	29	252	9.0	15.0
3	郭晓令	浙江大学动物科学学院	36	267	9.0	15.0
4	吴志鹏	浙江大学动物科学学院	6	13	3.0	3.0
5	赵俊生	浙江大学动物科学学院	4	12	2.0	3.0