大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响

• 作者: 徐云峰 徐志卿 李晓晓 杨予涛 罗汉将
• 来源期刊: 中国康复理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: rno-miR-15b-5p 细胞外信号调节激酶1 重叠延伸聚合酶链式反应 pmiR-ERK13'UTR pmiR-ERK1-mut3'UTR 荧光素酶活性检测
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 166-172
• 页数: 7页
• 分类号: R749.4
• 字数: 5918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9771.2017.02.010

摘要

目的 以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用.方法 采用miRNeasy Mini Kit提取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的总RNA,以PC12细胞的cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)将ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-ReportTM vector中.利用重叠延伸PCR,将ERK1基因3'UTR中的rno-miR-15b-5p潜在的靶序列TGCTGCT分别突变成CGAACGT和GTACACG,并将突变的ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-ReportTM vector中.结果 成功构建了包含ERK1基因3'UTR区的野生型报告载体pmiR-ERK13'UTR和突变型报告载体pmiR-ERK1-mut 3'UTR.利用荧光素酶活性检测系统,发现rno-miR-15b-5p mimic可以降低野生型报告载体的活性(P<0.001),但不影响突变型报告载体的活性.结论 成功构建ERK1基因3'UTR区野生型和突变型双荧光素酶报告载体,初步证明ERK1基因3'UTR区是rno-miR-15b-5p的结合靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐志卿	首都医科大学基础医学院	29	45	4.0	6.0
2	杨予涛	首都医科大学基础医学院	17	12	2.0	3.0
3	李晓晓	首都医科大学基础医学院	8	1	1.0	1.0
4	徐云峰		3	8	1.0	2.0
5	罗汉将	首都医科大学基础医学院	1	0	0.0	0.0