猪肉中常见致病菌的多重直接PCR法的建立与应用

• 作者: 宋雪 张林波 曲志娜 李月华 王君玮 王娟 盖文燕 赵建梅 赵格 黄秀梅
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 多重直接PCR 猪肉 食源性致病菌
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 710-715
• 页数: 6页
• 分类号: R378
• 字数: 4389字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.08.009

摘要

目的 建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法.方法 根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,建立并优化多重直接PCR反应条件,检测引物的扩增特异性和灵敏性,并将所建立的方法应用于实际采集猪肉样本的检测,与金标培养法相比较,计算多重直接PCR检测法的敏感性、准确性以及阳性预测值.结果 所设计的多重直接PCR引物对5种菌都有特异扩增,最低检出限量大肠杆菌为10 CFU,金黄色葡萄球菌敏感性为100 CFU,沙门氏菌、李斯特菌、小肠耶尔森氏菌敏感性可达1 CFU.60份猪肉样本中检出大肠杆菌15份、沙门氏菌6份、金黄色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小肠耶尔森氏菌35份,阳性检出率均高于金标培养法,总体检测敏感性为100％,准确性为94％,阳性预测值为81.44％.结论 多重直接PCR法实现了同时对各食源性致病菌敏感特异的检测,并且省去了提取模板的步骤,将检测时间缩短至3h左右,便于食品安全风险监测中常见食源性致病菌的通量检测.