抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体的筛选、可溶性表达及鉴定

• 作者: 朱庆玲 李脉 王舰平 许锋 赵树进
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 木瓜凝乳蛋白酶 单链抗体 噬菌体抗体库 可溶性表达
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 531-535
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4019字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2017032701

摘要

目的 筛选具有较好结合能力的抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体(scFv),并进行可溶性表达和鉴定.方法 前期实验室构建了抗木瓜凝乳蛋白酶全套鼠源scFv噬菌体抗体文库,对抗体文库进行4轮富集后,采用ELISA筛选抗木瓜凝乳蛋白酶阳性scFv;将ELISA最强阳性克隆pFAB5C-scFv的重组噬粒切除gene 3 singal后进行表达,SDS-PAGE分析、双抗体夹心ELISA分析、鉴定表达产物,并将阳性克隆可变区序列与Gene Bank数据库进行同源性比较.结果 经4轮噬菌体展示富集,筛选到3株亲和力相对较高的阳性克隆;去除gene 3 singal后的重组scFv在宿主菌E.coli XL1-blue中主要以可溶性的形式进行了表达,且对木瓜凝乳蛋白酶有较好的亲和力.基因序列分析表明阳性克隆所包含的重链可变区基因(VH)与小鼠免疫球蛋白γ重链基因同源性达96％,轻链可变区基因(VL)和小鼠免疫球蛋白轻链κ基因同源性达98％.结论 成功筛选出结合能力较好的抗木瓜凝乳蛋白酶scFv并进行了可溶性表达,所克隆的scFv基因符合小鼠抗体序列的特征.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵树进	广州军区广州总医院药学部	271	2349	23.0	37.0
2	朱庆玲	广东食品药品职业学院实验中心	12	22	3.0	4.0
3	许锋	广东食品药品职业学院实验中心	19	37	4.0	5.0
4	王舰平	广东食品药品职业学院实验中心	12	63	5.0	7.0
5	李脉	广东食品药品职业学院实验中心	6	4	1.0	1.0