抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定

• 作者: 冼燕萍 周思 王弘 邓龙 郭新东
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 克百威 重组单链抗体 可溶性表达
• 年，卷（期）: 2015,（16）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 178-182
• 分类号: TS201.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2015.16.028

摘要

为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(scFv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达.以pCANTAB5E-scFv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到scFv基因,再与载体pLIP6/GN连接,转化大肠杆菌BI21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序.重组菌经0.6 μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定.采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性.结果表明重组质粒pLIP6/GN-scFv含有插入片段,scFv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/mL.这说明成功构建了重组质粒pLIP6/GN-scFv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭新东		37	133	8.0	9.0
2	冼燕萍		17	72	5.0	7.0
3	周思		3	6	2.0	2.0