Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP3基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

• 作者: 吴双 左伟勇 朱善元 洪伟鸣 王安平 王永娟
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP3基因 昆虫细胞 表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 649-653
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3723字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2017.03.024

摘要

为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus type-Ⅰ,DHAV-I)SH株的主要结构蛋白VP3,首先根据DHAV-I SH株VP3基因序列设计1对引物,RT-PCR方法扩增出VP3基因,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体pFB-VP3,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP3,在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP3.间接免疫荧光结果显示重组蛋白获得了正确表达,能与鸭抗全病毒阳性血清发生特异性反应.Western blot结果显示表达的重组蛋白分子量约为27000.表明,DHAV-I SH株的主要结构蛋白VP3在昆虫细胞中获得了成功表达,为VP3结构蛋白的功能研究及相关亚单位疫苗的研制奠定了基础.